白灵侧耳水渍状斑点病初探_内裤有水渍白色斑点
2020-01-01 00:00:00私享空间
近几年白灵侧耳（Pleurotus nebrodensis）水渍状斑点病（wet blotch disease）频繁发生，对罹病样品进行显微观察和病原菌分离，并对附生优势菌株进行分子鉴定和致病性研究。结果表明，在水渍状病变组织内未发现
近几年白灵侧耳（Pleurotus nebrodensis）水渍状斑点病（wet blotch disease）频繁发生，对罹病样品进行显微观察和病原菌分离，并对附生优势菌株进行分子鉴定和致病性研究。结果表明，在水渍状病变组织内未发现和分离到细菌和其它真菌；病斑表面的附生优势菌株L1和F1分别为Pseudomonas sp.和Arthrobacter sp.，回接试验检测无致病性，初步推断该病害不是由细菌或真菌侵染引起的。
白灵侧耳（白灵菇）； 水渍状斑点病； 食用菌 白灵侧耳（Pleurotus nebrodensis）又称白灵菇，我国于20世纪80年代人工驯化栽培成功［1, 2］，90年代中后期开始商业化栽培，发展迅速，至2010年我国白灵侧耳的年总产量已经达到30万吨，成为我国重要的特色珍稀食用菌之一。随着白灵侧耳栽培规模的扩大，病害也日益严重。笔者对天津市蓟县白灵侧耳生产调查时发现，一种典型症状为菌盖表面出现水渍状斑点的病害（以下简称水渍状斑点病，wet blotch disease），在一般菇房中发生率在60%～80%，通常不影响产量，但是严重降低子实体品质，给白灵侧耳生产造成很大损失。 目前已报道的食用菌斑点病（blotch disease）多数是细菌性病害，如双孢蘑菇（Agaricus bisporus）褐斑病（brown blotch disease）、黄斑病（yellow blotch disease）和姜黄色斑点病（ginger blotch disease）的病原分别是托拉斯假单胞菌（Pseudomonas tolaasii）［3］、姜黄色假单胞菌（P. gingeri）［4, 5］和 ……此处隐藏2006个字…… 、72和96 h菌落生长情况。 1.4分离菌株的分子鉴定 挑取纯化后的细菌菌体，置于200 μL TE缓冲液（10 mmol/L Tris-HCl， 1 mmol/L EDTA, pH = 8.0）中振荡1 min，10000 g离心5 min，收集沉淀；加200 μL TE缓冲液振荡30 s，离心 5 min，收集沉淀；再加入200 μL TE缓冲液振荡30 s，沸水浴10 min；然后10000 g离心5 min， 收集上清液作为模板DNA。使用通用引物fd2（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和rp1（5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’）［10］扩增16S rDNA。PCR反应体系为50 μL，其中 10×PCR缓冲液5 μL， dNTP（2.5 mmol/L） 2 μL，正向和反向引物（5 μmol/L）各2 μL，Taq DNA聚合酶［宝生物工程(大连)有限公司］1 U，模板DNA 2 μL。PCR反应程序为94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，36个循环； 72 ℃ 7 min。 PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。利用试剂盒［Agarose Gel DNA Fragment Recovery Kit Version 2.0，宝生物工程(大连)有限公司］按照说明书切胶纯化PCR产物，然后由上海英骏生物技术有限公司利用引物fd2和rp1进行测序。